Мультиплексная qPCR-панель для выявления 25 возбудителей трансмиссивных клещевых инфекций

Разработана панель TBP из восьми мультиплексных qPCR-анализов для одновременного выявления 25 клещевых патогенов (7 бактерий, 14 вирусов, 4 паразита). Пороговые значения Cq установлены с помощью секвенирования ампликонов nested/semi-nested PCR и цифровой ПЦР в качестве референсных стандартов. Пределы обнаружения (LOD99%) составили 3,5–131 копий/реакцию для плазмид, 10²–10³ копий/мл крови и 10³–10⁴ копий на пул клещей; предложена двухуровневая схема интерпретации (Cq ≤ 36,6 — положительный результат; Cq 36,6–39,6 — подтверждение в двух повторах) с AUC 0,979, чувствительностью и специфичностью по 96,5%. При скрининге 2333 клещей, 59 грызунов и 553 лихорадящих пациентов выявлено 14 патогенов у 16,9% клещей (395/2333); у 7,9% пациентов с лихорадкой неясного генеза на амбулаторном этапе (25/317) обнаружено 5 патогенов, включая вирус SFTSV и Ehrlichia spp., циркулирующие среди местных клещей; в когорте FUO выявлен один случай Rickettsia spp.; у грызунов преобладали Bartonella spp. (67,8%).